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感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 时间:2019/06/18 11:39:48

感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理

制备(复制的~)
1.将冻存的菌种1:100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.
2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.
3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4000rpm下离心10min收集菌体.
4.弃上清,用事先冰浴的0.1mol/Lcacl2重新悬浮细胞,冰浴30min.
5.收集菌体,条件同上.
6.弃上清,在冰浴条件下加入0.1mol/Lcacl2溶液.
7.分装保存(40%甘油与感受态细胞1:1混合,使甘油的终浓度为20%).
转化
1 连接产物加入感受态中
2 冰上放置30分钟
3 42° 90秒
4 冰上2-5分钟
5 涂板~
细胞转染(这里说的是脂质体转染,以六孔板为例,如果是电转或者病毒侵染的话再问我吧)
对于每一个孔
1 一管200ul OPTI+5ul lipofectin 静置5分钟
2 一管200ul OPTI+4ug 质粒
3 两管混合 静置20分钟
4 加入孔板中
5 4-6小时后换液

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